У нас уже
176407
рефератов, курсовых и дипломных работ
Сделать закладку на сайт
Главная
Сделать заказ
Готовые работы
Почему именно мы?
Ценовая политика
Как оплатить?
Подбор персонала
О нас
Творчество авторов
Быстрый переход к готовым работам
Контрольные
Рефераты
Отчеты
Курсовые
Дипломы
Диссертации
Мнение посетителей:
Понравилось
Не понравилось
Книга жалоб
и предложений
Название
Участие многофункционального белка YB-1 в регуляции Р-гликопротеина и в ответе клетки на стресс
Количество страниц
84
ВУЗ
МГИУ
Год сдачи
2010
Бесплатно Скачать
23369.doc
Содержание
Содержание
Введение...6
I. Обзор литературы...и
1.1. Мулътифункционалъный белок YB-1...11
Структура YB-1...11
1.1.2. Функции YB-1...12
1.1.3. YB-1 и пролиферация клеток...16
1.1.4. Активация YB-1 при стрессе...19
1.2. Множественная лекарственная устойчивость опухолевых клеток...20
1.2.1. Лекарственная устойчивость, обусловленная снижением накопления
препарата внутри клетки...22
1.2.1.1. Множественная лекарственная устойчивость, обусловленная • Р-гликопротеином...22
i 1.2.1.2. Множественная лекарственная устойчивость, определяемая
белками семейства MRP...-...27
1.2.1.3. Множественная лекарственная устойчивость и белок BCRP...28
1.2.1.4. Множественная лекарственная устойчивость, определяемая
белком LRP...29
1.3. Роль белка YB-1 в регуляции множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток...30
1.3.1. Экспрессия и внутриклеточная локализация YB-1 в культурах
опухолевых клеток, резистентных к химиопрепаратам...30
1.3.2. Исследование участия YB-1 в регуляции генов и белков МЛУ...32
1.3.3. Исследование взаимосвязи между уровнем экспрессии
и внутриклеточной локализацией белка YB-1 с экспрессией белка Pgp
и прогнозом лечения больных...34
П. Материалы и методы...37
11.1. Линии клеток, использованные в работе...37
11.2. Препапаты, использованные в работе...37
ИЗ. Выделение РНК и ОТ-ПЦР...37
11.4. Иммуноцитохимическое определение экспрессии YB-1 и белков МЛУ...38
11.5. Иммуноцитохимическое определение внутриклеточной локализации
YB-1 и окраска клеток на белки МЛУ...38
11.6. Иммунологический анализ клеточных лизатов (Western-blot анализ)...40
11.7. Трансфекция клетокКВЗ-1 иНСТ116кДНК YB-1...41
11.8. Синтез и трансфекция siRNA/YB-1...41
//.9. Определение чувствительности клеток к цитостатикам...41
III. Результаты...42
///./. Исследование экспрессии и локализации белка YB-1 в культивируемых линиях чувствительных и резистентных к лекарственным препаратам
опухолевых клеток...42
111.1. 1. Модели исследования...42
III. 1.2. Анализ уровня экспрессии мРНК/белка YB-1 в клетках с разными
уровнями лекарственной устойчивости...44
III. 1.3. Исследование локализации белка YB-1 в парах чувствительных
и резистентных опухолевых клеток...46
III. 1.4. Сопоставление уровня экспрессии и локализации белка YB-1 в парах чувствительных и резистентных опухолевых клеток с экспрессией
генов/белков МЛУ...49
III. 1.4.1. Анализ уровня экспрессии MDRl/Pgp...49
III.1.4.2. Определение уровня экспрессии генов/белков MRP 1, BCRP, LRP...50
III.2. Влияние повышения экспрессии YB-1 на экспрессию генов/белков МЛУ и лекарственную устойчивость опухолевых клеток...55
111.2.1. Исследование влияния транзиторного введения YB-1
на лекарственную устойчивость опухолевых клеток...55
111.2.2. Исследование влияния транзиторного введения YB-1 на экспрессию
Pgp в условиях действия цитостатиков...57
Ш.2.3. Анализ влияния стабильной гиперэкспрессии YB-1 на экспрессию генов/белков МЛУ...58
III. 2.4. Определение скорости пролиферации клонов клеток
с гиперэкспрессией YB-1...62
Ш.З. Влияние подавления экпрессии YB-1 на экспрессию генов/белков
МЛУ(эффекты siRNA/YB-1)...63
III.3.I. Подавление экспрессии эндогенного YB-1 и экспрессия генов МЛУ...63
Ш.З.2. Влияние подавления эндогенного YB-1 на пролиферацию клеток...63
111.4. Влияние химиотерапевтических препаратов на локализацию YB-1
в клетках и на экспрессию генов МЛУ...65
III.4.1. Влияние препаратов на локализацию YB-1 в клетках...65
Ш.4.2. Активация экспрессии генов МЛУ под действием цитостатиков...68
111.5. Определение уровня экспрессии мРНК YB-1 и белков МЛУ
у больных острым нелимфобластным лейкозом (ОНЛЛ)...70
IV. Обсуждение...72
V. Выводы...83
VI. Список литературы...84
Список сокращений
МЛУ - множественная лекарственная устойчивость
мРНК - матричная РНК
Cpl - Цисплатин
CSD - Домен холодового шока
Cytarab - Цитарабин
Dox - доксорубицин
GFP - зеленый флуоресцирующий белок
RNP - комплекс белков с рибонуклеиновыми кислотами
siRNA/YB-1 - малая интерфирирующая РНК к последовательности гена YB-1.
Vbl - Винбластин
Введение
Множественная лекарственная устойчивость опухолевых клеток (МЛУ) является серьезным препятствием на пути химиотерапии злокачественных новообразований. МЛУ - это система защиты популяции опухолевых клеток от множества лекарств, различающихся по химической структуре и механизму действия на клетку (Glavinas H. et al., 2004; Ставровская А., 2000). Повышенная активность белка Р-гликопротеина (Pgp) была первым обнаруженным механизмом, определяющим МЛУ. В последующие годы были найдены другие молекулярные механизмы МЛУ и стало ясно, что лекарственная устойчивость опухолевых клеток — сложный феномен, в основе которого лежит целый ряд молекулярных изменений, и что в одной и той же клетке могут функционировать одновременно несколько механизмов, модулирующих чувствительность опухолевых клеток к лечению. Таким образом, на первый план в области изучении МЛУ выходят исследования молекулярных механизмов' координированной регуляции разных защитных систем клетки, которые могут определять многофакторную МЛУ. С целью решения этой задачи мы исследовали роль белка YB-1 в регуляции МЛУ.
YB-1 клеток млекопитающих является членом мульти функционально го семейства ДНК/РНК связывающих белков с эволюционно консервативным доменом холодового шока (Kohno К. et al., 2003; Evdokimova V. et al., 1999). В бактериальных клетках члены этого семейства, известные как главные белки холодового шока, определяют адаптацию бактерий к росту при низких температурах. YB-1 млекопитающих, связываясь с ДНК, функционирует в качестве фактора транскрипции и регулирует экспрессию генов, содержащих Y-бокс, в том числе, экспрессию гена главного комплекса гистосовместимости II (Didier D. et al., 1988), гена множественной лекарственной устойчивости MDR1 (Ohga Т. et al., 1998) и генов циклинов (Jurchott К. et al., 2003). Наряду с этим, YB-1 участвует в репарации, рекомбинации и репликации
ДНК (Gaudreault I. et al., 2004). Взаимодействуя с мРНК, этот белок принимает участие в альтернативном сплайсинге мРНК в ядре (Raffetseder U. et al., 2003), является основным упаковочным белком для мРНК в цитоплазме и регулирует время жизни (Evdokimova V. et al., 2001) и матричную активность мРНК в белковом синтезе (Evdokimova V. et 1998). Показано, что YB-1 может быть вовлечен в определение устойчивости клеток к действию ионизирующей радиации и химических агентов, повреждающих ДНК (Ohga Т. et al., 1996). Высказывают мнение, что он может претендовать на роль раннего маркера множественной лекарственной устойчивости опухолей.
В феномене МЛУ опухолевых клеток могут играть роль как повышение количества YB-1 в клетках, так и его перемещение из цитоплазмы в ядра клеток (Kohno К. et al., 2003; Kuwano M. et al., 2004). В различных опухолях (раках молочной железы, раках легкого, остеосаркомах и др.) повышено количество клеток с ядерной локализацией YB-1 по сравнению с нормальными тканями, и найдено, что такое повышение коррелирует с неблагоприятным течением заболеваний и устойчивостью новообразований к терапии (Bargou R. et al., 1997; Shibahara K. et al., 2001). Показано, что ряд химиотерапевтических препаратов индуцирует перемещение YB-1 в ядра клеток (Ohga Т. et al., 1996). Найдено, что введение YB-1 в клетки рака молочной железы может приводить к гиперэкспрессии гена MDR1, кодирующего Pgp, и к возникновению МЛУ (Bargou R. et al., 1997). Однако роль YB-1 в возникновении и развитии МЛУ остается недостаточно ясной. В частности, отсутствуют систематизированные исследования резистентных опухолевых клеток. Немногочисленные работы, в которых сравнивались отдельные резистентные линии опухолевых клеток с соответствующими клетками дикого типа, показывают, что количество белка YB-1 повышено в ядрах культур резистентных клеток рака кишечника НСТ15, рака яичников KFr и рака молочной железы MCF-7/ADR по
сравнению с их чувствительными вариантами (Stein U. et al., 2001; Yahata H. et al., 2002). После введения в культивируемые клетки GSEs (генетических супрессорных элементов) и последующего отбора в среде с цитостатиком культура клеток приобрела МЛУ, что сопровождалось увеличением уровня экспрессии мРНК нескольких генов, в том числе и YB-1 (Levenson V. et al., 2000). Неясно, однако, насколько часто связаны гиперэкспрессия и/или ядерная локализация YB-1 с конститутивной гиперэкспрессией генов и белков МЛУ, действительно ли гиперэкспрессия YB-1 в резистентных опухолевых клетках влияет одновременно на экспрессию нескольких разных генов МЛУ. Эти сведения позволили ли бы судить о том, вовлечен ли YB-1 в регуляцию сложной, многофакторной МЛУ. Нет данных относительно связи YB-1 с уровнем резистентности культур опухолевых клеток различного тканевого происхождения. Результаты таких опытов позволили бы оценить, насколько широко YB-1 участвует в формировании МЛУ, на каких этапах развития МЛУ необходимо участие YB-1. Недостаточно исследовано влияние химиотерапевтических препаратов разных типов на локализацию YB-1 в клетке и на экспрессию генов МЛУ.
Целью данной работы является исследование молекулярных механизмов регуляции экспрессии белков, определяющих множественную лекарственную устойчивость опухолевых клеток, при участии многофункционального белка YB-1.
В задачи данного исследования входило следующее:
- Исследовать уровень экспрессии и локализацию гена/белка YB-1 в шести парах чувствительных и резистентных клеточных линий различного гистогенеза.
- Исследовать взаимосвязь уровня экспрессии YB-1 в резистентных клетках с экспрессией генов/белков МЛУ: Pgp, MRP1, BCRP, LRP.
- Исследовать влияние повышенного уровня экспрессииYB-1 на возникновение лекарственной устойчивости опухолевых клеток.
- Исследовать влияние активации или подавления экспрессии YB-1 на базальный уровень экспрессии нескольких генов/белков МЛУ.
- Исследовать влияние активации или подавления экспрессии YB-1 на клеточную пролиферацию.
- Исследовать стресс-индуцированную транслокацию YB-1 в ядра опухолевых клеток и активацию экспрессии генов МЛУ при воздействии на клетку химиотерапевтических препаратов.
Новизна: в настоящей работе впервые исследована взаимосвязь уровня экспрессии и локализации YB-1 с экспрессией нескольких генов МЛУ, а также с уровнями лекарственной устойчивости клеток одновременно в достаточно большом наборе чувствительных и резистентных клеточных линий различного гистогенеза. Впервые показано, что хотя в резистентных линиях разного происхождения количество клеток с локализацией YB-1 в ядрах повышено по сравнению с родительскими чувствительными вариантами, однако, это количество может значительно различаться в разных линиях. Впервые обнаружено, что уровень экспрессии YB-1 в резистентных вариантах клеток повышен иногда, но не всегда и не коррелирует с уровнем лекарственной устойчивости клеток. Впервые показано, что повышение количества YB-1 может коррелировать с повышенным уровнем экспрессии нескольких генов/белков МЛУ. Впервые найдено, что увеличение (в результате стабильной трансфекции клеток конструкцией, содержащей YB-1) или подавление в клетках уровня экспрессии гена YB-1 (под влиянием siRNA/УВ-У) сопровождается, соответственно, либо активацией, либо супрессией базального уровня экспрессии нескольких генов МЛУ. Впервые показано, что введение в клетки полноразмерного гена YB-1 приводит к повышению экспрессии генов МЛУ MRP1, BCRP, LRP и повышению количества кодируемых ими белков. Получены оригинальные данные, показывающие, что количество мРНК гена MDR1 при этом не повышается. Впервые
найдено, что некоторые химиотерапевтические препараты (винбластин и цисплатин) индуцируют перемещение белка YB-1 в ядра клеток, в то время как другие препараты (цитарабин и доксорубицин) не оказывают этого действия. Впервые показано, что лишь препараты, вызывающие перемещение YB-1 в ядра клеток, индуцируют повышение количества мРНК гена MRP1, в то время как количество мРНК гена MDR1 повышается всеми препаратами, независимо от их способности индуцировать транслокацию YB-1 в ядра. Впервые исследован материал от больных острым нелимфобластным лейкозом и показано, что повышенному количеству белка YB-1 сопутствует повышенное количество белка MRP1 в лейкозных клетках.
I. Обзор литературы
Поскольку задачей нашей работы было исследование роли белка YB-1 в регуляции множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток, мы включили в обзор литературы раздел, посвященный общей характеристике YB-1, раздел, в котором излагаются общие сведения относительно множественной лекарственной устойчивоти опухолевых клеток, и раздел, посвященный данным литературы относительно роли YB-1 в развитии МЛУ, которые были опубликованы к началу нашей работы.
I. 1. Мультифункциональный белок YB-1.
За последние 10 лет было описано увеличивающееся число мульти-функциональных белков, которые вовлечены в регуляцию генной экспрессии на транскрипционном и посттранскрипционном уровнях.
Представителями таких белков является семейство белков, связывающих Y-бокс. Характерным свойством Y-бокс белков является их способность связывать инвертированный ССААТ-бокс или ATTGG последовательность, посредством высоко консервативного участка (70 А.К.), называемого CSD (домен холодового шока) (Li W et al., 1997). Это название связано с тем, что некоторые бактериальные белки, экспрессирующиеся в условиях пониженной температуры, обладают этим доменом. Y-бокс белки представляют высоко консервативную группу белков, связывающих нуклеиновые кислоты и представленные в бактериях, растениях, животных и человеке (Swamynathan S et al., 2002). В данном разделе будет подробно описан мультифункциональный, Y-бокс связывающий белок YB-1. Этот белок имеет ряд других названий, таких как: YB1, ВР-8, CsdB, DbpB, Ybxl, Nsep-1, MDR-NF1.
1.1.1. Структура YB-1.
Также как некоторые другие эукариотические транскрипционные факторы, белок YB-1 обладает несколькими доменами с различными функциями. Высоко
консервативный центральный CSD содержит основные и ароматические аминокислотные остатки для присоединения остова нуклеиновых кислот в молекулах ДНК или РНК (Zasedateleva О et al., 2002, Izumi H et al., 2001). CSD содержит RNP-1 и RNP-2 подобные мотивы, которые связывают двух- и одноцепочечные ДНК и РНК. Глицин-обогащенный N-конец этих белков довольно различен и обуславливает тканевую и функциональную специфичность членов этого семейства. На гидрофильном С-конце белков располагаются чередующиеся фрагменты кислотных и основных аминокислотных остатков, называемых заряженными зипперами (Kloks С et al., 1998). Они отвечают за мультимеризацию при белок-белковом взаимодействии, а также за неспецифическое связывание ДНК и РНК. Человеческий ген белка YB-1 содержит приблизительно 19 kbp геномной ДНК, включающей 8 экзонов, локализованных на хромосоме 1, сайт 1р34 (Kloks С et al., 2002).
1.1.2. Функции YB-1.
Разнообразные биологические роли белка YB-1 включают: позитивную и негативную модуляцию транскрипции широкого ряда генов, модификацию хроматина, локализацию, трансляционную маскировку и сплайсинг мРНК, а также инициацию трансляции. Кроме этого он может обуславливать физиологический ответ клетки на стресс, регулировать множественную лекарственную устойчивость клеток, участвовать в развитии вирусной инфекции и др.
YB-1 узнает участок ДНК, поврежденный цисплатином, и принимает участие в процессах репарации ДНК (Marenstein D et al., 2001). Он вовлечен в активацию генов, участвующих в синтезе ДНК, таких как: тимидин киназа, PCNA/циклин, ДНК полимераза а, топоизомераза 2. Было показано, что YB-1 и PCNA взаимодейсвуют напрямую, участвуя в репарации ДНК при повреждении ее цисплатином (Ise T et al., 1999). Взаимодействие между основными ферментами эксцизионной репарации и трансфакторами было продемонстрировано на примере стимуляции человеческой
эндонуклеазы 3 посредством YB-1 (Marenstein D, et al., 2001). Добавление YB-1 к эндонуклеазе 3 in vitro усиливало скорость ДНК-гликозилазной и апурин-апиримидин лиазной активности. Также было показано, что YB-1 проявляет 3-5' экзонуклеазную активность (Izumi H et al., 2001).
Существует ряд работ, где была продемонстрирована способность YB-1 усиливать или подавлять транскрипцию различных генов самостоятельно или через взаимодействие с другими транскрипционными факторами. Партнерами для YB-1 могут служить следующие белки: YY-1, АР-2, Рига, NF-kB/RelA, DbpA, NF-Y, p53, hnRNP К и мультивалентный фактор цинковые пальцы CTCF.
Рассмотрим несколько примеров такого взаимодействия. Так например, связывание AP-2/YB-1 комплекса с энхансером приводило к образованию протяженного одноцепочечного ДНК участка и могло стабилизировать конформационные изменения ДНК. Такое взаимодействие приводило к синергическому усилению транскрипции этими факторами гена желатиназы А (металл-протеиназы 2), продукт которого играет важную роль в процессе инвазии и метастазирования. Есть данные, свидетельствующие в пользу того, что YB-1 может конкурировать с р53 за связывание сайта АР-2, который также оказывает синергический эффект совместно с АР-2 на активацию энхансерной последовательности гена желатиназы A (Mertens P et al., 1998, Mertens P et al., 2002). Кроме этого было показано, что супрессор опухолевых метастазов Nm-23 бета может блокировать активацию транскрипции гена желатиназы А, опосредованную YB-1 (Cheng S et al., 2002).
YB-1 может активировать транскрипцию человеческого полиомавируса JCV по нескольким механизмам: во-первых, посредством рекрутирования трансактиватора p65/RelA к вирусному промотору. Во-вторых, совместная экспрессия YB-1 и Рига синергически стимулирует активность промотора полиомавируса JCV (Safak M et al.,
1999, Chen N et al., 1995). Как уже говорилось ранее, помимо положительного эффекта, YB-1 может оказывать и негативный эффект на процесс транскрипции. YB-1 способен репрессировать экспрессию МНС1-А beta через связывание NF-YA, блокируя образование NF-YA и NF-YB комплекса, который необходим для активации транскрипции соответствующего гена. YB-1 транслоцируется в ядро при добавлении TGF-бета к крысиным фибробластам и может активировать там дистальный промотор гена коллагена альфа 1, содержащий TGF-бета-респонсивный элемент . В то же время другими исследователями было показано, что YB-1 может супрессировать транскрипцию гена коллагена альфа 1 через регуляторный элемент в проксимальном промоторе (Norman J et al., 2001). Гиперэкспрессия YB-1 снижала уровень мРНК и белка коллагена альфа1 в различных типах клеток. У человеческого YB-1 было обнаружено 3 домена, которые могут связывать р53. При этом взаимодействии стимулировалось связывание специфических последовательностей для р53 (Okamoto Т et al., 2000). YB-1 при коэкспрессии с трансфактором CTCF, имеющим множественные сайты специфичности в ДНК, приводит к заметному усилению репрессии транскрипции CTCF-регулируемого гена c-myc (Chernukhin I et al., 2000). YB-1 является репрессором транскрипции гена fas (CD95 ассоциированного с клеточной смертью) и уменьшает уровень его базальной экспрессии (Lasham A et al., 2000). Таким образом, YB-1 может играть важную роль в контроле клеточного выживания. Также YB-1, связывая трансфактор YY-1, репрессирует усиление транскрипции гена grp78 (Ca2+ связывающий белок) в клетках, подвергшихся стрессовому воздействию. (Li W et al., 1997).
Хотелось бы отметить, что транскрипционная активность YB-1 сильно зависит от клеточного контекста. Например синергическая активность YB-1 и Рига на энхансерно-промоторный участок полиомавируса JCV наблюдали в глиальных клетках, но не в других типах клеток. Трансактивационные свойства YB-1 на
промотор гена легкой цепи миозина 2v обнаружены в сердечных миоцитах, но не в клетках почки мартышки. Средний уровень транскрипционной активации YB-1 промотора матриксной металл-протеиназы-2 наблюдали в мезенхимальных, но не в эпителиальных клетках.
Многие патогенные вирусы обладают способностью использовать Y-бокс-белки клетки хозяина для активации транскрипции своих генов через вирусный промотор в инфицированных клетках. Например, HTLV-1 и HIV-1 регулируются YB-1 (Sawaya В et al., 1998). Также известно, что репликация полиомавируса человека JCV контролируется YB-1, который может взаимодействовать с вирусными белками: агнопротеином и большим Т-антигеном (Safak M et al., 2002). Белок аденовируса Е1В и YB-1 действуют совместно, чтобы способствовать репликации аденовируса 5 типа (Holm P et al., 2002). El В вовлечен в перемещение трансфактора YB-1 в ядро, где он облегчает вирусную репликацию посредством индукции экспрессии гена Е2. Гиперэкспрессия YB-1 усиливает tat-индуцированную активацию HIV-1 минимального промотора, содержащего TAR-последовательность (Ansari S et al., 1999).
Помимо регулирования транскрипции YB-1 также принимает участие в регуляции трансляции. YB-1 является мажорным белком цитоплазматических RNP в различных соматических клетках. YB-1 обладает высокой аффинностью к м-РНК. Соматический YB-I является интегральным компонентом как трансляционно неактивных mRNP, так и активных mRNP, произошедших из полисом, хотя последние содержат в 2 раза меньший уровень белка (Skabkin M et al., 2001). Было показано, что YB-1 ингибирует или стимулирует трансляцию в зависимости от соотношения YB-1/м-РНК в т-RNP. Увеличение концентрации YB-1 приводило к ингибированию инициации трансляции in vitro, а гиперэкспрессия в клетках вызывала репрессию трансляции in vivo. Этот белок может играть роль в транспорте, заякоривании и
локализации м-РНК на актиновых филаментах в клетке через N-конец. Было показано, что YB-1 проявляет свой эффект на уровне инициации трансляции, а не на уровне элонгации или терминации полипептидного синтеза.
YB-1 может осуществлять сплайсинг пре-м-РНК аденовируса Е1А преимущественно при образовании в 13S изоформы. YB-1 связывает А/С обогащенные экзоновые энхансеры и стимулирует сплайсинг (вырезание) альтернативного экзона v4 CD44 (Stickeler E et al., 2001).
Было показано, что YB-1 необходим для стабилизации м-РНК интерлейкина-2 во время активации Т-клеток. Стабилизация происходит посредством образования т-RNP комплекса, отвечающего за специфические сигналы стабилизации м-РНК. Добавление или гиперэкспрессиия YB-1 значительно увеличивали стабильность кэпированных м-РНК in vitro, in vivo, тогда как исчезновение YB-1 приводило к ускорению разрушения м-РНК (Evdokimova V et al., 2001). YB-1 обеспечивает выживание эозинофилов путем стабилизации м-РНК гранулоцит-макрофаг колоний-стимулирующего фактора, что приводит к увеличению синтеза этого фактора (Capowski E et al., 2001). Важно отметить, что стабилизация м-РНК носит независимый от последовательности характер.
YB-1 способен плавить вторичную структуру м-РНК, а также обеспечивать быстрый отжиг комплиментарных цепочек нуклеиновых кислот. Также он ускоряет отжиг дуплексов РНК и ДНК и катализирует обмен нитями между двухцепочечными и одноцепочечными РНК. Фосфорилирование YB-1 казеин киназой 2 селективно ингибирует отжиг ДНК. Небольшое количество YB-1 обеспечивает образование дуплексов нуклеиновых кислот, а избыток вызывает разворачивание двухцепочечных форм. Можно предположить, что изменение конформации нуклеиновых кислот является основным механизмом регуляции YB-1 генной экспрессии. ДНК-отжиговая активность белка может быть важна для репарации и рекомбинации ДНК.
Таким образом, YB-1 может регулировать активность белков, регулирующих жизненно важные процессы клетки, действуя на разных уровнях их синтеза. В связи с этим исследование роли YB-1 в регуляции различных сторон жизнедеятельности клетки представляется перспективным.
1.1.3. YB-1 и пролиферация клеток.
Существует серия работ, в которых показана взаимосвязь белка YB-1 с клеточной пролиферацией, дифференцировкой, апоптозом. Уровень экспрессии YB-1 значительно изменяется в процессе эмбрионального развития и тесно коррелирует со скоростью клеточной пролиферации (Lu ZH et al., 2005). Высокая экспрессия YB-1 наблюдается в ранних эмбрионах курицы (Grant et al., 1993) и крысы (Ito et al., 1994), затем экспрессии YB-1 неуклонно снижается в процессе развития. Высокий уровень YB-1 обнаруживается in vivo в активно пролиферирующих взрослых тканях, таких как эпителий желез кишечника (Shibao et al., 1999) и регенирирующая печень (после химически индуцированного повреждения или гепатоэктомии). YB-1 индуцируется в различных типах клеток в ответ на митогенные стимулы, например, в активированных цитокинами Т клетках (Sabath et al., 1990), активированных сывороткой фибробластах, активированных агонистами эндотелиальных клетках (Stenina, et al., 2000). Введение в клетки YB-1 приводило к гиперэкспрессии мРНК и белка рецептора эпидермального фактора роста EGFR (Berquin et al., 2005). Более того, EGFR в этих клетках был конститутивно фосфорилирован в отсутствии экзогенного лиганда. Эти данные свидетельствуют о том, что гиперэкспрессия YB-1 может приводить к независимости от ростового фактора EGF клеток эпителия молочной железы человека путем активации сигнального пути, вовлекающего EGFR. Повышенная экспрессия YB-1 часто обнаруживается в различных опухолях человека, включая рак молочной железы, рак яичников, рак щитовидной железы, рак прямой кишки, остеосаркому и саркому мягких тканей (Kohno et al., 2003). Аналогичные данные были получены для
Список литературы
Цена, в рублях:
(при оплате в другой валюте, пересчет по курсу центрального банка на день оплаты)
1425
Скачать бесплатно
23369.doc
Найти готовую работу
ЗАКАЗАТЬ
Обратная
связь:
Связаться
Вход для партнеров
Регистрация
Восстановить доступ
Материал для курсовых и дипломных работ
29.04.24
Результаты оценки психологических детерминант гражданской идентичности учащихся старших классов
29.04.24
Программа формирования гражданской идентичности старшеклассников
29.04.24
Психологические основания для разработки программы формирования гражданской идентичности старшеклассников
Архив материала для курсовых и дипломных работ
Ссылки:
Счетчики:
© 2006-2022. Все права защищены.
Выполнение уникальных качественных работ - от эссе и реферата до диссертации. Заказ готовых, сдававшихся ранее работ.